Клонирование и анализ экспрессии синтетических генов аполипопротеина А-I человека в клетках Escherichia coli и метилотрофных дрожжей Pichia pastoris

Реферат

В работе проведено клонирование и изучена экспрессия синтетических генов белка апо А-I человека в метилотрофных дрожжах Pichia pastoris X-33 и в клетках E. coli Rosetta 2(DE3). Показано, что в клетках дрожжей экспрессия гена белка апо А-I сопровождается лизисом клеток и накоплением в культуральной жидкости непроцессированого белка апо А-I, что связано, вероятно, с его амфифильными свойствами. Экспрессия гена зрелого белка апо А-I в клетках E. coli позволяет получить целевой белок, при этом выход апо А-I составляет 50 мг/л культуры. По своему размеру и способности реагировать с антисывороткой к нативному апо А-I рекомбинантный полипептид соответствует нативному белку.

Тэги

E. coli Rosetta 2(DE3), Pichia pastoris X-33, аполипопротеин А-I, аффинная очистка, клонирование, рекомбинантный белок, экспрессия генов

Список литературы

1. Acton S., Rigotti A., Landschulz K.T. Identification of scavenger receptor SR-BI as a high density lipoprotein receptor // Science. 1996. 271. 518–520.

2. Bergeron J., Frank P.G., Emmanuel F. Characterization of human apolipoprotein A-I expressed in Escherichia coli // Biochim. Biophys. Acta. 1997. 1344. 139–152.

3. Brouillette C.G., Anantharamaiah G.M., Engler J.A. Structural models of human apolipoprotein A-I: a critical analysis and review // Biochim. Biophys. Acta. 2001. 1531. 40–46.

4. Cregg J.M. Distinctions between Pichia pastoris and other expression systems // Methods Mol. Biol. 2007. 389. 1–10.

5. Hartmut H.J., Janine J.G., Regina H. Expression and purification of recombinant human apolipoprotein A-I in Chinese hamster ovary cells // Protein Expr. Purif. 1997. 10. 226–236.

6. Mallory J.B., Kusher P.J., Protter A.A. Expression and characterization of human apolipoprotein A-I in Chinese hamster ovary cells // J. Biol. Chem. 1987. 262. 4241–4247.

7. Martines L.O., Jacquet S., Esteve J.P. Ectopic b-chain of ATP synthase is apolipoprotein A-I receptor in hepatic HDL endocytosis // Nature. 2003. 421. 75–79.

8. Mcguire K.A., Davidson W.S., Jonas A. High yield overexpression and characterization of human recombinant proapolipoprotein A-I // J. Lipid Res. 1996. 37. 1519–1528.

9. Michael J.H., Mohammad H., Areyoud M. Suppression of apolipoprotein A-I gene expression in HepG2 cells by TNF and IL-1 // Biochim. Biophys. Acta. 2003. 1623. 120–128.

10. Pyle L.E., Fidge N.H., Barton P.A. Production of mature human apolipoprotein A-I in a Baculovirus-insect cell system: pro-peptide is not essential for intracellular processing but may assist rapid secretion // Anal. Biochem. 1997. 25. 253–258.

11. Robert O.R., Trudy M.F., Michael N.O. Optimized bacterial expression of human apolipoprotein A-I // Protein Expr. Purif. 2003. 27. 98–103.

12. Scanu A.M., Edelstein C., Keim P. Serum lipoproteins // The Plasma Proteins. Vol. 2. Ed. F. Puntam. N. Y.: Acad. Press, 1975. 317–391.

13. Vitello L.B., Scanu A.M. Studies on human serum high density lipoproteins: self-association of apolipoprotein A-I in aqueous solutions // J. Biol. Chem. 1976. 251. 1131–1136.

14. Wei Q., Wu M.P., Chen P.F. Cooperation of HDL receptor and hepatic lipase in the selective uptake of HDL2-CE by rat hepatic sinusoidal cells // Acta Biochim. Biophys. Sin. 1996. 28. 659–664.

15. Zhu Y.E., Xu H.B., Zhao Zh.A. Expression of human apolipoprotein A-I in Baculovirus-insect cell system // Chin. J. Biotechnol. 2003. 19. 692–697.

Об авторах (для корреспонденции):

Мамаев А.Л. – научный сотрудник лаборатории генной инженерии, e-mail: alexeymamaev@inbox.ru

Беклемишев А.Б. – д.б.н., проф., зав. лаб. генной инженерии, e-mail: beklem@ niibch.ru

Полный текст

6-5-2014.pdf

Поступило: 08/02/2015