ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МОДИФИЦИРОВАННЫХ ВАРИАНТОВ РЕКОМБИНАНТНОГО АПОЛИПОПРОТЕИНА А-I В КАЧЕСТВЕ ТРАНСПОРТЕРОВ МАЛЫХ ИНТЕРФЕРИРУЮЩИХ РНК В ОПУХОЛЕВЫЕ КЛЕТКИ
Реферат
В связи с широким развитием явления РНК-интерференции перед исследователями стоит задача получения эффективных переносчиков малых интерферирующих РНК (миРНК). Ранее нами получен модифицированный рекомбинантный полипептид на основе аполипопротеина А-I человека (апо А-I), способный связываться с плазмидными ДНК. Цель исследования – изучение способности модифицированных рекомбинантных белков апо А-I переносить миРНК в опухолевые клетки. Материал и методы. Исследования проводились на модели трансформированных макрофагов мышей линии RAW 264.7, стабильно экспрессирующих ген зеленого флуоресцирующего белка GFP (клеточная линия клона 8А3). В качестве переносчиков миРНК использовали рекомбинантный про-апо А-I и модифицированный аналог про-апо А-I, несущий на С-конце 10 аминокислотных остатков лизина (апоАK10). Для трансфекции использовали липофектамин 2000 (lipofectamine 2000). Белки получали из соответствующих штаммов-продуцентов E. coli. Объектом переноса служил дуплекс миРНК, в котором один нуклеотид был комплементарен матричной РНК гена gfp. Измерение флуоресценции клеток проводили с помощью флуоресцентного планшетного анализатора. Результаты и их обсуждение. Обнаружено, что белки про-апо А и апо АK10, меченные флуоресцеина изотиоцианатом, проникают в клетки линии RAW 264.7. Результаты исследования РНК-интерференции показали, что инкубация клеток с миРНК и липофектамином 2000 вызывает снижение флуоресценции клеток линии 8А3, что свидетельствует о корректном подборе миРНК к матричной РНК гена gfp. В то же время флуоресценция клеток клона 8А3 при культивировании с миРНК и рекомбинантными формами про-апо А-I и апо АK10 не отличалась от флуоресценции контрольных клеток, инкубированных только с миРНК. Заключение. Рекомбинантные модифицированные формы про-апо А-I и апо АK10 проникают в трансформированные мышиные макрофаги линии RAW264.7, однако не способствуют явлению РНК-интерференции в этих клетках.
Тэги
Поляков Л.М. – д.м.н., проф., зав. лабораторией медицинской биотехнологии, e-mail plm@niibch.ru
